寡糖学院

壳寡糖聚合度检测方法

发布时间:2018-05-17 15:44:50

  壳寡糖的功能和其聚合度有着密切的关系,目前常见的检测壳寡糖聚合度的方法有以下几种。

  1、 TLC:薄层色谱

  将壳寡糖用蒸馏水配成1mg/ml的溶液,取样品于薄层板上,展开剂:正丙醇/水/氨水=6/3/1(V/V);显色剂:苯胺/二苯胺;

此方法简单,容易操作,适合聚合度8以下的寡糖。

  2、 PAGE:聚丙烯酰胺凝胶电泳

  取处理好的壳寡糖样品10ul上样。恒压400V电泳1h后1000V电泳直到ANTS前沿接近凝胶底部。电泳过程采用循环水冷却系统保持电泳槽温度4-7℃,染色剂染色后于紫外透射光(365nm)下拍照保存。

此方法需要专门的制备凝胶设备和电泳设备,步骤较为繁琐,条件不容易控制,但适合的聚合度较为宽泛,适合聚合度20以下的寡糖,比TLC应用范围广。

  3、 HPLC:高效液相色谱

  将壳寡糖用蒸馏水配成5mg/ml的溶液,过0.22um滤膜,用HPLC进行检测。色谱条件:色谱柱Shodex NH2 P 50 4E (4.6mm×250mm);流动相:A水、B乙腈;检测器:蒸发光散射检测器。

此方法需要专业的高效液相色谱设备和色谱柱,需要专业的操作人员,分辨率高于其他色谱法,可重复性高,自动化操作,分析精度高。

  4、 电喷雾质谱(ESI-MS)分析

将壳寡糖配成0.1mg/ml的溶液,加入同等体积的乙腈,注射泵直接进样,样品流速10μL/min。。检测仪器:美国Thermo Scientific LTQ Orbitrap XL质谱仪;检测条件:正离子检测模式,喷雾电压(Spray voltage)3.0kV,透镜电压(Tube lens)80V,毛细管温度(Capillary temp)275℃,毛细管电压(Capillary voltage)43V,鞘流气体流速(Sheath gas flow rate)8arb。 

  此方法需要专业的质谱仪,需要专业人员操作,可重复性高,自动化操作,分析精度高。